省时省力的质粒鉴定方法

发布时间：2024-11-18 00:40

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1. 从平板上挑单菌落，越多越好（20-30），放于1.5ml离心管中，加1.2ml 左右的液体LB培养基，摇3-5h. 200rpm。

2. 用1.5ml离心管收集一定量（1ml，留0.2ml）含有重组质粒的菌液，10000rpm， 30sec，弃上清，留管底沉淀（应留有一定量（0.2）的菌液放于4度中，以备摇菌）。

3. 加入30-50ul TE ，重悬菌液，混合均匀。

4. 加入25ul 酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），混合均匀。

5. 加入5ul 上样缓冲液（6X or10X），混合均匀，12000rpm， 10min，取蓝色上清液（约20-30ul）直接进行电泳，结果会显示条带。

a：最上边，几万bp的条带是基因组DNA。

b：其次，下边是你所要的重组质粒，约几千bp。

c：再下边可能会出现RNA的三条带，总共就这几条带。

通过经验，来判断一下看看哪个应该是连上了，哪个没连上，最后把连上的那个挑出来，然后用放在4度中的对应的那个菌，摇菌，第二天再提质粒。

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